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- 實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)中大小鼠微生物檢測項目的考量
1、我國實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)設(shè)立的背景與意義
命科學(xué)研究中使用的實驗動物是人類疾病研究的替難者遙 為得到可靠的實驗數(shù)據(jù)袁實驗動物自身的質(zhì)量需要得到有效的控制遙 因此袁實驗動物的質(zhì)量保障研究一直是實驗動物科學(xué)的研究重點。
命科學(xué)研究中使用的實驗動物是人類疾病研究的替難者遙 為得到可靠的實驗數(shù)據(jù)袁實驗動物自身的質(zhì)量需要得到有效的控制遙 因此袁實驗動物的質(zhì)量保障研究一直是實驗動物科學(xué)的研究重點。
國外實驗動物學(xué)科發(fā)展較早袁其實驗動物產(chǎn)業(yè)較早開始市場化發(fā)展袁市場競爭機制促使企業(yè)提高實驗動物產(chǎn)品質(zhì)量遙 為了提高自身實驗動物的質(zhì)量袁各企業(yè)均制定了各自企業(yè)的實驗動物質(zhì)量控制。標(biāo)準(zhǔn)遙 國外并沒有一個國家針對實驗動物制定國家標(biāo)準(zhǔn)遙 但是一些實驗動物的社會組織袁比如美國的實驗動物學(xué)會堯歐洲的FELASA組織袁他們對實驗動物的質(zhì)量控制提出了建議或指南，對實驗動物繁育和使用機構(gòu)的實驗動物的使用具有一定的指導(dǎo)意義。
我國的實驗動物學(xué)科和實驗動物產(chǎn)業(yè)起步較晚。在我國實驗動物行業(yè)發(fā)展的早期袁實驗動物自身的質(zhì)量袁特別是微生物質(zhì)量沒有保障袁這一狀況嚴(yán)重的阻礙了我國實驗動物行業(yè)的健康發(fā)展袁也使得實驗動物科學(xué)對整個生命科學(xué)研究的支撐作用打了折扣。 為了提高實驗動物本身的質(zhì)量袁我國在1994年以國家標(biāo)準(zhǔn)的形式為實驗動物的生產(chǎn)和使用單位提出了實驗動物質(zhì)量控制的要求。在過去的20多年間，我國的實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)的制定與實施袁無疑為我國實驗動物質(zhì)量提高起到積極促進作用袁同時也使得我國的實驗動物的質(zhì)量保障研究得到長足發(fā)展。
實驗動物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在國家標(biāo)準(zhǔn)層面上不應(yīng) 該是一成不變的。隨著實驗動物科學(xué)的發(fā)展，我國 的實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)也經(jīng)歷了多次修訂。我國實 驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)的變化也反映了我國實驗動物科 學(xué)與產(chǎn)業(yè)的進步。應(yīng)該明確的是，我國的實驗動物 國家標(biāo)準(zhǔn)從其起草制定開始,其目的就是為了提高 我國實驗動物的質(zhì)量,更好的為我國的生命科學(xué)研 究服務(wù)。國家標(biāo)準(zhǔn)一方面可以對實驗動物生產(chǎn)機 構(gòu)的產(chǎn)品提出質(zhì)量要求，包括實驗動物的穩(wěn)定性以 及安全性,保障使用者的利益；同時我國的實驗動 物國家標(biāo)準(zhǔn)也是指導(dǎo)實驗動物生產(chǎn)和使用機構(gòu)科 學(xué)使用和管理實驗動物的規(guī)范性指南。我國的實驗動物學(xué)科和實驗動物產(chǎn)業(yè)起步較晚。在我國實驗動物行業(yè)發(fā)展的早期袁實驗動物自身的質(zhì)量袁特別是微生物質(zhì)量沒有保障袁這一狀況嚴(yán)重的阻礙了我國實驗動物行業(yè)的健康發(fā)展袁也使得實驗動物科學(xué)對整個生命科學(xué)研究的支撐作用打了折扣。 為了提高實驗動物本身的質(zhì)量袁我國在1994年以國家標(biāo)準(zhǔn)的形式為實驗動物的生產(chǎn)和使用單位提出了實驗動物質(zhì)量控制的要求。在過去的20多年間，我國的實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)的制定與實施袁無疑為我國實驗動物質(zhì)量提高起到積極促進作用袁同時也使得我國的實驗動物的質(zhì)量保障研究得到長足發(fā)展。
2、實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)中動物微生物攜帶狀態(tài)的等 級劃分
目前，我國的實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)在微生物和寄 生蟲的控制方面將動物進行了分級。目前的國家 標(biāo)準(zhǔn)分為普通級、清潔級、無特定病原體級以及無 菌級。對于無菌動物的定義比較好理解，在這種動 物體內(nèi)和體外不應(yīng)存在任何微生物和寄生蟲。但 是對于其他3個級別的定義在現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)中仍 有待商榷。
按照現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)，普通級實驗動物區(qū)別于 野生動物的地方在于排除了人獸共患病原體和動 物烈性傳染性病原體。而清潔級增加排除對動物 危害大的病原體和對科學(xué)研究干擾大的病原體。 在這兩個等級中人獸共患病原體必須排除,應(yīng)該說 所有應(yīng)用于科學(xué)研究的動物都需要對人獸共患病 原體加以控制。隨后的兩個概念動物烈性傳染性 病原體和對動物危害大的病原體，這兩個概念如何 理解，涉及的病原體如何區(qū)分？現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)中 大鼠和小鼠不包括普通級動物，而對于犬和猴又沒 有清潔級動物這個類別，同時使用四個級別的動物 包括了豚鼠、地鼠和兔。對于一些對動物危害大的 病原體,在哪類科學(xué)研究中可以作為實驗材料的實 驗動物攜帶呢？而對科學(xué)研究干擾大的病原體，這 個概念出現(xiàn)在了清潔級動物和SPF級動物的排除范圍，這些概念該如何界定？
這里需要界定兩個概念。第一,病原體對動物 的危害。動物的烈性傳染病對動物的危害可想而 知，不僅對動物個體本身存在影響，更是對動物群 體產(chǎn)生影響。所有的實驗動物均應(yīng)排除，而其他的 病原體,作為微生物和寄生蟲,都是感染性的，只是 烈性程度可能在一定條件下存在差異。但是對于 實驗動物的影響會存在差異,有些病原體的感染雖 不會引起動物的大量死亡，但會對動物的基本生命 體征產(chǎn)生影響,這些病原體在應(yīng)用于科學(xué)研究的實 驗動物中也需要排除。在一定的歷史階段，由于我 國的實驗動物學(xué)科和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的水平的限制，我們 可能無法要求排除這些病原體，但是隨著科學(xué)的進 步，所有對科學(xué)研究產(chǎn)生影響的病原體均應(yīng)該得到 有效控制。第二個概念是對科學(xué)實驗動物干擾。 在排除了對大部分科學(xué)研究都有危害的病原體后， 剩余的干擾動物實驗的病原體就有了危害程度上 和危害傾向性上的差異。某些病原體對于動物的 影響是有組織、器官或是系統(tǒng)傾向性的，因此在研 究這些系統(tǒng)的生命現(xiàn)象時，這類病原就需要排除; 而有些病原體，僅僅對某些品系的動物有影響，比 如免疫缺陷的動物，或是基因修飾的動物,某些病 原在其他品系動物呈現(xiàn)潛伏感染不致病的,在這些 動物中就成為了致病因素。因此這些病原在特殊 條件下就需要排除。
這里就有了另外一個概念，排除特定病原體的 動物（SPF)。實際上目前國家標(biāo)準(zhǔn)中的普通級動物 和清潔級動物也是排除了特定微生物的動物，也可 以成為SPF動物，只是特定微生物的選擇有一定局 限性。而目前國家標(biāo)準(zhǔn)中的SPF級動物選擇排除 的病原體項目也僅僅是增加了幾個檢測項目。在 排除病原體項目的選擇上目前我們的國家標(biāo)準(zhǔn)是 單一的,但是隨著科學(xué)的發(fā)展，這種單一標(biāo)準(zhǔn)似乎 存在一些問題院列入國家標(biāo)準(zhǔn)的一些病原對某類實 驗干擾不大，排除這些病原無疑增加了生產(chǎn)和使用 成本;更多的是，我們有些研究需要排除一些病原， 但是這些病原體又沒有列入我們的國家標(biāo)準(zhǔn)中。 因此對于SPF的定義在國家標(biāo)準(zhǔn)中不應(yīng)該是特定 的，應(yīng)該給予使用者一定的選擇性。這種選擇的標(biāo) 準(zhǔn)可以有兩個，一個是動物品系的要求，例如對于 免疫缺陷動物,需要排除更多的條件致病微生物; 第二個是使用的需求，對于不同的實驗?zāi)康?，有選 擇的排除病原項目。因此，對于SPF的定義，我們的國家標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該給出選擇性的指導(dǎo)意見。對于我們的國家標(biāo)準(zhǔn)，業(yè)界存在兩種聲音，一 種認(rèn)為我們的國家標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該僅僅設(shè)定那些嚴(yán)重干 擾動物實驗的病原，或者是降低標(biāo)準(zhǔn);另一種認(rèn)為 我們國家標(biāo)準(zhǔn)的病原覆蓋范圍還不完善，應(yīng)該增加 國外普查的病原，或者可以認(rèn)為是提高標(biāo)準(zhǔn)。實際 上這兩種意見可以統(tǒng)一起來。對于人獸共患病原 體、對動物危害嚴(yán)重的病原體、對大多數(shù)實驗有嚴(yán) 重干擾的病原體，所有應(yīng)用于科學(xué)研究的實驗動物 中必須排除。排除上述3類病原體的出發(fā)點在于保 障從業(yè)人員的自身健康;保證實驗動物的健康，防 止疫病，維護實驗動物福利；為了科學(xué)研究的準(zhǔn)確 性，提供實驗動物質(zhì)量。排除這類病原體應(yīng)該是實 驗動物質(zhì)量的最低要求，因此作為國家標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)該 是強制執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)。對于特殊品系的動物，以及有 特殊應(yīng)用的動物,應(yīng)該單獨制定排除病原范圍，這 類動物不應(yīng)該再執(zhí)行單一的標(biāo)準(zhǔn),SPF動物的定義 應(yīng)該多元化。
3我國國家標(biāo)準(zhǔn)排除病原項目與國際實驗動物機 構(gòu)排除項目的區(qū)別
國外并沒有對實驗動物的質(zhì)量以國家標(biāo)準(zhǔn)的 形式進行約束。國外不同的實驗動物生產(chǎn)機構(gòu)各 自執(zhí)行企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，以實驗動物自身的質(zhì)量應(yīng)對市場 競爭。近年來,我國的實驗動物產(chǎn)業(yè)得到較好的發(fā) 展，北京、上海、廣東等地有一些實驗動物生產(chǎn)機構(gòu) 形成了較大規(guī)模，各企業(yè)自身也制定了企業(yè)標(biāo)準(zhǔn), 也以實驗動物自身的質(zhì)量參與市場競爭。但目前 我國的實驗動物行業(yè)的大環(huán)境仍存在諸多問題，仍 需要行政部門的監(jiān)管。我國的實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn) 與國際組織的推薦性的標(biāo)準(zhǔn)以及企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有什么 不同呢？
目前國際上重要的實驗動物生產(chǎn)機構(gòu)Charles River■公司對小鼠可排除20種病毒、15種細(xì)菌，大 鼠可排除14種病毒、16種細(xì)菌。Tacomic公司嚙齒 動物可排除21種細(xì)菌、23種病毒及16種寄生蟲。 而Jackson Laboratory小鼠排除的病原涵蓋18種病 毒、16種細(xì)菌和8種寄生蟲。這些病原檢測項目表 明了生產(chǎn)企業(yè)的技術(shù)能力，是企業(yè)核心競爭力的 體現(xiàn)。
一些國外企業(yè)檢測的病原體如奇異變形桿菌；病毒如小鼠輪狀病毒（mouse rotavirus)，K病 毒（K virus )，小鼠巨細(xì)胞病毒（mouse cytomegalovirus)，小鼠胸腺病毒（mouse thymic virus )，小鼠諾如病毒（ murine norovirus)，小鼠微小病毒 (mouse parvovirus)等，我國現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)中并沒有 涉及,但列入這些企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的病原并非必須排 除。某些病原體對于動物的影響目前仍未確認(rèn)。 以小鼠諾如病毒MNV為例，MNV被這些機構(gòu)列入 了檢測項目，MNV在歐美國家的動物種群中檢出 率比較高,MNV又對某些免疫缺陷動物有影響，出 于多方面原因，MNV被這些企業(yè)列為排查目標(biāo)微生 物，也被FELASA組織作為推薦檢測病原[|]。但是 MNV對于免疫功能完全的動物沒有明顯影響，我們 的實驗研究發(fā)現(xiàn)正常途徑動物難以感染該病毒（未 發(fā)表數(shù)據(jù)）。我檢測實驗室對大群的實驗動物血清 學(xué)抽樣檢測未能發(fā)現(xiàn)MNV抗體的存在，只在一些 研究機構(gòu)的動物樣品中發(fā)現(xiàn)了 MNV抗體陽性，分 析原因也多出于動物的國際交流[2]。因此，筆者個 人認(rèn)為MNV目前沒有必要列入我國的國家標(biāo)準(zhǔn)進 行強制要求。
我國的實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)一方面規(guī)定了實驗 動物的國家規(guī)范，實際上還是企業(yè)和諸多檢測單位 參考的標(biāo)準(zhǔn)，因此，不僅要考慮病原的危害性，同時 還要參考我國國內(nèi)該病原的流行情況，有些病原雖 然對動物有一定危害，然而感染頻率較低，如果列 入強制標(biāo)準(zhǔn)，無疑會增加社會經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。因此各實 驗動物生產(chǎn)和使用單位對于此類病原可考慮自身 情況，安排監(jiān)控，可不再作為國家標(biāo)準(zhǔn)要求的檢測 項目 。
4目前我國實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)中小鼠、大鼠排除病 原項目的回顧性考量
是否把某一病原體納入實驗動物健康監(jiān)測范 圍，需要考量的因素有很多，包括院病原的感染范 圍，該病原是否主要感染嚙齒動物,是否也感染人 類;病原的傳播途徑,判定病原的易感性;病原對于 動物的損害，是否存在大范圍流行性感染的可能; 感染的臨床癥狀,是否引起動物疾病;對于動物代 謝、免疫或生理過程的影響水平；動物感染該病原 對于科學(xué)研究的影響。
表i列出的病原體有些屬于人獸共患的病原 體，例如沙門氏菌、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、漢 坦病毒。這些病原體目前在大鼠和小鼠的調(diào)查中 感染率并不高,但是由于它們具有感染從業(yè)人員的 風(fēng)險，因此必須列為實驗動物排查的病原。有些病 原體屬于動物的烈性病原體，如耘糟賊鼠痘病毒，這樣 的病原體也需要在動物種群中做適當(dāng)監(jiān)控。
大部分病原體對于免疫功能健全的動物并沒 有明顯致病作用，但是對于科學(xué)研究的干擾程度存 在差異。泰澤病原體目前在實驗動物中仍有一■定 檢出率，而且對于實驗研究的干擾較為顯著;肺支 原體情況類似，動物感染有一定檢出率，對多種研 究產(chǎn)生干擾;類似情況也包括小鼠肝炎病毒和仙臺 病毒。而某些病原對于科學(xué)研究的影響是局限性 的，如嗜肺巴氏桿菌主要影響大鼠,感染受累器官 為皮膚，因此涉及皮膚及相關(guān)組織的研究會受到 影響。
有些病原體屬于條件致病菌，例如金黃色葡萄 球菌、綠膿桿菌等。這些病原體在自然環(huán)境中廣泛 存在，因此實驗動物設(shè)施在控制這些病原時較為困 難，而且動物攜帶這些病原體多無明顯癥狀，且對 于科學(xué)研究的干擾是有限的。因此這類病原體可 以作為環(huán)境監(jiān)控的指標(biāo)，對于實驗動物質(zhì)量要求嚴(yán) 格的實驗設(shè)施可以將此類病原體列入監(jiān)控范圍。仍有許多新發(fā)現(xiàn)的病原體，比如嚙齒類動物的 細(xì)小病毒，這類病原體包含很多種，它們是否需要 列入實驗動物質(zhì)量控制的范圍仍需要更多的研究 以及數(shù)據(jù)支持。
如果某病原屬于人獸共患病原,并且嚙齒類動 物容易攜帶,這樣的病原應(yīng)該例行檢測；如果該病 原對于動物的健康有嚴(yán)重影響，會造成動物的疫 病，那么這樣的病原也應(yīng)該檢測；而有些病原對于 大多數(shù)研究存在證據(jù)充分的干擾風(fēng)險，這樣的病原 也應(yīng)該納入到國家標(biāo)準(zhǔn)中對所有動物進行監(jiān)測。 某些病原體可能僅對某一類型的研究存在干擾風(fēng) 險,或是僅對某一種類或是品系的動物有影響，或 者僅是一種條件致病的病原，這樣的病原可以在特 定的條件下選擇性的進行檢測。
國家標(biāo)準(zhǔn)不同于企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，列入國家標(biāo)準(zhǔn)中的 病原體也應(yīng)不同于各個設(shè)施自行制定的實驗動物 質(zhì)控計劃中的病原列表。實驗動物由于不同于普 通的動物，因此也不能僅僅排查動物疫病，只符合 動物檢疫的要求。我國實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)的意義。
例如沙門氏菌、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、漢 坦病毒。這些病原體目前在大鼠和小鼠的調(diào)查中 感染率并不高,但是由于它們具有感染從業(yè)人員的 風(fēng)險，因此必須列為實驗動物排查的病原。有些病 原體屬于動物的烈性病原體，如耘糟賊鼠痘病毒，這樣 的病原體也需要在動物種群中做適當(dāng)監(jiān)控。大部分病原體對于免疫功能健全的動物并沒 有明顯致病作用，但是對于科學(xué)研究的干擾程度存 在差異。泰澤病原體目前在實驗動物中仍有一■定 檢出率，而且對于實驗研究的干擾較為顯著;肺支 原體情況類似，動物感染有一定檢出率，對多種研 究產(chǎn)生干擾;類似情況也包括小鼠肝炎病毒和仙臺 病毒。而某些病原對于科學(xué)研究的影響是局限性 的，如嗜肺巴氏桿菌主要影響大鼠,感染受累器官 為皮膚，因此涉及皮膚及相關(guān)組織的研究會受到 影響。有些病原體屬于條件致病菌，例如金黃色葡萄 球菌、綠膿桿菌等。這些病原體在自然環(huán)境中廣泛 存在，因此實驗動物設(shè)施在控制這些病原時較為困 難，而且動物攜帶這些病原體多無明顯癥狀，且對 于科學(xué)研究的干擾是有限的。因此這類病原體可 以作為環(huán)境監(jiān)控的指標(biāo)，對于實驗動物質(zhì)量要求嚴(yán) 格的實驗設(shè)施可以將此類病原體列入監(jiān)控范圍。仍有許多新發(fā)現(xiàn)的病原體，比如嚙齒類動物的 細(xì)小病毒，這類病原體包含很多種，它們是否需要 列入實驗動物質(zhì)量控制的范圍仍需要更多的研究 以及數(shù)據(jù)支持。如果某病原屬于人獸共患病原,并且嚙齒類動 物容易攜帶,這樣的病原應(yīng)該例行檢測；如果該病 原對于動物的健康有嚴(yán)重影響，會造成動物的疫 病，那么這樣的病原也應(yīng)該檢測；而有些病原對于 大多數(shù)研究存在證據(jù)充分的干擾風(fēng)險，這樣的病原 也應(yīng)該納入到國家標(biāo)準(zhǔn)中對所有動物進行監(jiān)測。 某些病原體可能僅對某一類型的研究存在干擾風(fēng) 險,或是僅對某一種類或是品系的動物有影響，或 者僅是一種條件致病的病原，這樣的病原可以在特 定的條件下選擇性的進行檢測。國家標(biāo)準(zhǔn)不同于企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，列入國家標(biāo)準(zhǔn)中的 病原體也應(yīng)不同于各個設(shè)施自行制定的實驗動物 質(zhì)控計劃中的病原列表。實驗動物由于不同于普 通的動物，因此也不能僅僅排查動物疫病，只符合 動物檢疫的要求。我國實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)的意義
在于最終提高我國實驗動物這一特殊商品的質(zhì)量， 并以此提升我國的實驗動物產(chǎn)業(yè)發(fā)展，提高我國科 研水平。我國的國家標(biāo)準(zhǔn)還具有引導(dǎo)性，很多機構(gòu) 將國家標(biāo)準(zhǔn)作為各自單位的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，而且許 多科研人員對于實驗動物了認(rèn)識不多，對于SPF等 級的動物的認(rèn)識也是不全面的。因此設(shè)定我國實 驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)既要考慮強制性要求，同時也要做 好推薦性指導(dǎo)。
參考文獻：向志光，佟巍，張麗芳，孔琪，魏強
(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗動物研究所，北京100021)
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